一站式动物mRNAOUT

产品及特点

构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA，mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly(A)尾巴，所以可以通过与Oligo(dT)纤维素的亲和结合而与其他RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。本产品专门用于从动物组织中提取mRNA，其操作步骤如下：

它具有下列特点：

1. 一站式，由柱式动物RNA提取试剂和mRNA提取试剂两个产品整合而成，即开即用，非常方便。

2. 一次可以处理50-100 mg的动物组织，能得到约10-15 μ g总RNA，从中可得0.1-0.5 μ g左右的mRNA。

3. Oligo(dT)纤维素吸附能力强，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相当于2000-3000 μ g mRNA。

4. mRNA提取过程操作简单，只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。

5. 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。

使用及效果

1. 用柱式动物RNAOUT的方法提取动物总RNA，最后用50μL洗脱，将两管收集在一起，共得到100μL总RNA（详见柱式动物RNAOUT的使用手册）。

2. 从总RNA中纯化mRNA：将0.5 mL 溶液A（结合液）加入到一管装有Oligo(dT)纤维素的离心管中，放置5分钟后离心吸弃上清后待用。将制备的总RNA100μL加热到65℃ 5分钟后加入等体积的溶液A，转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中，颠倒混匀数次，离心后将上清转移到一个离心管中。用0.5 mL溶液A，混匀后4℃ 200 g 离心5分钟，小心弃上清。重复上步洗3-5次。用DEPC水洗脱并收集mRNA。

3. 用微量核酸沉淀剂沉淀mRNA（详见微量核酸沉淀剂使用手册）。

注：所得mRNA只占总RNA的5%左右，很微量很珍贵，一般不宜电泳检测。