GMCK^TMCell counting kit-8(CCK-8 Kit)

产品简介：

CCK-8 kit是含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）化合物，用于细胞增殖检测的一类检测试剂盒。它的作用原理类似于MTT，在电子耦合试剂作用下被细胞线粒体中的一些脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜（Formazan）。细胞增殖越快，生成的Formazan越多，则颜色就越深。用酶标仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。CCK-8 Kit方法已被广泛应用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选和细胞增殖试验等。

    产品特点：

1．  与MTT法和XTT法相比线性范围广，灵敏度高；

2．  使用方法简单方便，即开即用；

3．  试剂稳定性强，重复性好，适合批量样品检测；

4．  毒性低，细胞形态不发生改变；

5．  酚红和血清对其无明显影响。

产品包装：

保存条件：

避光-20℃保存，两年有效；-4℃保存，一年有效。

实验步骤：

细胞活性检测

1.       在96孔板中加入100μl细胞悬液，将培养板放入细胞培养箱中培养（在37℃，5%CO₂的条件下）。

2.       向每孔中加入10μl CCK-8溶液（比例是10:1），同时设置空白对照孔。（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）

3.       放入细胞培养箱中培养0.5-4h，孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度而定，可以设计时间梯度，选择适宜的孵育时间。

4.       用酶标仪在450nm波长处测定光吸收值。

5.       如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

细胞增殖-毒性检测

1．   在96孔板中加入100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。

2．   向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。

3．   将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4．   每孔加入10μl CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5．   将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6．   用酶标仪在450nm波长处测定光吸收值。

7．   如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：

1.       初次实验前，应对接种细胞数量和孵育时间进行摸索，找出最佳细胞数量和孵育时间。

2.       细胞接种均匀，培养板边孔的水分容易蒸发，因此只加PBS或培养基，以减少实验误差。

3.       检测主要依赖脱氢酶催化反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

4.       如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。