西方印迹法分析（Far-Western Blot分析）是在传统的蛋白质印迹技术基础上发展而来的，能够在复杂的生物样品中分离和鉴定蛋白质间的相互作用。通过此技术，研究人员可以识别和验证蛋白质的结合伙伴，这对于理解细胞信号传导通路、疾病机制、药物研发以及生物标志物识别等领域具有意义。西方印迹法分析（Far-Western Blot分析）作为一种特异性高、灵敏度强的检测手段，利用标记的蛋白质探针与在膜上固定的靶蛋白结合，通过后续的检测步骤使得研究者可以确定蛋白质间的直接相互作用。西方印迹法分析应用非常广泛。首先，它在基础科学研究中用于验证理论预期的蛋白质间相互作用。此外，在药物开发过程中，通过识别药物靶标和潜在的脱靶效应，该技术可以帮助优化候选药物的特异性。在癌症研究中，解析癌细胞中异常的信号传导路径可为个性化治疗提供新的思路和靶点。

一、西方印迹法分析（Far-Western Blot分析）实验步骤

1、蛋白质样品制备

从细胞、组织或其他生物样本中提取总蛋白质，通过细胞裂解液裂解细胞，然后进行离心等操作去除细胞碎片等杂质，得到含有各种蛋白质的样品，并用蛋白定量方法如 BCA 法确定蛋白质浓度。

2、SDS-PAGE 电泳

将蛋白质样品与上样缓冲液混合，加热使蛋白质变性，然后将其加入到 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中进行电泳。在电场作用下，蛋白质根据其分子量大小在凝胶中分离，分子量小的蛋白质迁移速度快，分子量大的蛋白质迁移速度慢。

3、转膜

电泳结束后，将凝胶中的蛋白质转移到固相膜上，常用的膜有硝酸纤维素膜（NC 膜）和聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）。转移方法有湿转法和半干转法等，通过电转移的方式使蛋白质从凝胶转移到膜上，从而使蛋白质固定在膜上以便后续操作。

4、封闭

将膜放入含有封闭剂的溶液中孵育，常用的封闭剂有牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉等。封闭的目的是占据膜上未结合蛋白质的位点，防止后续步骤中探针蛋白或其他试剂的非特异性结合，降低背景信号。

5、探针孵育

将标记好的已知蛋白质探针与膜在适当的缓冲液中孵育，使探针蛋白与膜上可能与之相互作用的蛋白质充分接触并结合。孵育条件如温度、时间和缓冲液的成分等需要根据具体的蛋白质和实验要求进行优化。

6、洗膜

孵育结束后，用缓冲液多次洗涤膜，去除未结合的探针蛋白和其他杂质，以减少背景干扰，保证检测结果的准确性。

7、检测

根据探针蛋白的标记方式选择相应的检测方法。若探针蛋白是放射性标记的，可通过放射自显影检测；若是荧光标记的，可使用荧光成像系统检测；若是酶标记的，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）标记，则可加入相应的底物进行显色反应，通过观察颜色变化或使用化学发光底物进行发光检测，然后通过成像系统记录结果。

二、注意事项与常见问题

1、非特异性结合

在进行西方印迹法分析时，非特异性的探针结合可能导致假阳性结果。因此，在样品处理和膜封闭时需特别小心，以减少噪声干扰。

2、探针选择与标记

需选择合适的探针，探针应具有良好的特异性和稳定性，同时应根据实验需求选择合适的标记方式以提高检测灵敏度。

3、信号强度与背景干扰

优化实验条件以获得清晰的信号至关重要。调整探针浓度、封闭条件及检测方法，能够有效降低背景干扰，提升分析的准确性。

西方印迹法分析（Far-Western Blot分析）能够在复杂样品中检测微量的蛋白质相互作用，且具有较高的特异性，有助于减少误报。适用于多种生物材料和蛋白质类型，包括膜蛋白和核蛋白，这使得其在各类生物化学研究中应用广泛。百泰派克生物科技为科研工作者提供专业的西方印迹法分析（Far-Western Blot分析）服务。我们的分析服务采用先进的技术流程，确保每一个步骤的精确和严谨。我们致力于为客户提供高质量的蛋白质相互作用数据，助力科研项目的顺利开展。通过与我们合作，研究者可以享受到个性化定制、快速响应和专业支持的服务体验。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

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