随着生物医药和生命科学领域的迅速发展，蛋白质类药物和生物制品的需求持续增长。蛋白质的纯度不仅直接影响其生物活性和临床安全性，也关系到生产工艺的优化和产品质量的可控性。作为一种高效、准确、可重复的分析技术，高效液相色谱（HPLC）在蛋白质纯度分析中占据着核心地位，广泛应用于从研发到生产再到质控的各个环节。

一、HPLC在蛋白质纯度分析中的核心作用

蛋白质纯度分析的目的是识别并定量目标蛋白中的杂质，包括宿主蛋白、聚集体、降解产物及化学修饰异构体等。HPLC之所以成为主流技术，主要源于其高分辨率、灵敏度和定量能力。HPLC不仅能快速分离复杂蛋白混合物，还能通过不同色谱模式和检测手段获取样品中多种杂质信息。

1、分析蛋白单体纯度

在蛋白药物生产中，确保蛋白单体含量达到工艺和质量标准是首要任务。HPLC可以有效分离蛋白单体与其聚集体和降解产物，实现对主峰纯度的精确定量。尤其在单克隆抗体、疫苗蛋白及多肽药物生产中，HPLC是监控产品纯度的重要手段。

2、检测蛋白聚集体

蛋白聚集不仅影响药效，还可能引发免疫原性反应。采用HPLC中的体积排阻色谱（SEC），可快速分离并检测蛋白聚集体的比例及其分布情况，为工艺优化和质量控制提供数据支持。

3、分析降解产物及修饰形式

在蛋白质的生产、储存和运输过程中，可能出现降解和化学修饰，如脱酰化、氧化和异构化。HPLC通过反相色谱（RP-HPLC）和离子交换色谱（IEC），能有效识别这些杂质，帮助评估蛋白质的稳定性和安全性。

4、定量宿主细胞蛋白（HCP）杂质

生物制药中，宿主细胞蛋白的残留控制至关重要。HPLC结合特异性检测（如免疫检测或质谱联用），可用于HCP的定量分析，确保其含量低于规定限度。

二、HPLC在蛋白质纯度分析中的应用领域

1、生物制药质量控制

在重组蛋白、多肽及抗体药物生产中，HPLC作为质量控制标准方法广泛应用。通过HPLC，可以系统评估原料蛋白、半成品和终产品的纯度，及时发现并排除潜在的质量隐患。其自动化和高重复性特点，保障了生产批次间数据的一致性和可靠性。

2、工艺开发与优化

在工艺开发阶段，HPLC用于对不同纯化工艺（如层析步骤、缓冲条件）中蛋白纯度的快速评估。通过对比各工艺步骤中样品的HPLC图谱，工艺人员能够优化条件，提高纯度和收率，缩短工艺开发周期。

3、结构功能研究

HPLC不仅用于检测蛋白纯度，还能揭示蛋白结构多样性。例如，离子交换色谱可分离电荷异质体，反相色谱可分离肽段或修饰形式，体积排阻色谱可显示不同聚集体。通过这些分析，研究人员能深入理解蛋白结构对功能的影响，为后续优化提供依据。

4、疫苗及生物制品安全评估

疫苗蛋白和其他生物制品的纯度直接关系到免疫原性和安全性。HPLC能够准确检测疫苗蛋白中的杂质，如聚集体、宿主蛋白及降解产物，从而降低免疫反应风险，提高疫苗稳定性和安全性。

5、临床研究和法规合规

HPLC分析结果作为蛋白药物申报和临床研究的关键数据，广泛用于支持产品质量、安全性和有效性评估。其高分辨率和定量精度符合药典和监管要求，成为质量控制的重要手段。

三、应用中面临的挑战及解决思路

尽管HPLC在蛋白质纯度分析中应用广泛，但在实际操作中仍面临一些挑战：

• 蛋白吸附和回收率问题：某些蛋白易在色谱柱或系统中吸附，影响分析准确性。通过优化流动相组成、添加有机溶剂或选择适宜固定相，可以减小吸附效应。
• 分离条件复杂：不同蛋白的理化性质差异较大，需针对样品特点调整pH、盐浓度、有机溶剂比例及梯度洗脱条件。结合样品预处理和条件筛选，可提高分离效率。
• 杂质峰识别困难：对于复杂蛋白样品，杂质峰识别需要结合紫外、荧光及质谱等多种检测手段，必要时可采用二维色谱系统以提高分辨能力。

无论是在生物制药、工艺开发、质量控制还是临床研究中，高效液相色谱都以其高分辨率、灵敏度和定量能力，成为蛋白质纯度分析的核心技术。随着技术的不断进步，HPLC在蛋白质纯度分析领域将继续拓展应用深度和广度，助力生物医药和生命科学的持续发展。作为值得信赖的合作伙伴，百泰派克始终致力于提供高品质的HPLC测定蛋白纯度服务，助力企业和科研单位提升分析效率与数据质量。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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