人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒-产品资讯-资讯-生物在线
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人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒

作者：上海雅吉生物科技有限公司 2021-05-28T09:20 (访问量:3060)

人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 产品及特点

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型（Human T-lymphotropic Virus 1 HTLV 1）是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的 RNA 病毒，在体内主要感染 CD4+T淋巴细胞可引起成人 T 淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV 相关脊髓病（HTLV-Iassociated myelopathy ， HAM/ 热带痉挛性下肢瘫， tropical spasticparaparesis TSP）及色素层炎（uveitis），主要通过输血、针头、性行为、母子传染。HTLV-I 病毒是爱滋病毒（HTLV-I) 的远亲，但 HTLV-I 和爱滋病的发生没有任何关连。目前各捐血中心以酵素免疫法全面筛检 HTLV-I 病毒。
本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型探针法荧光定量 RT-PCR 试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型高度保守区设计，不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。
5.本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6.本产品只能用于科研。

成分

编号

十孔盒包装

探针法 qRT-PCR 缓冲液

190504a

500μL（蓝盖）

探针法 qRT-PCR 酶混合液

190504b

100μL（红盖）

荧光 PCR 专用模板稀释液

180701

1 mL（黄盖）

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型探针

15-87810yw

100 μL（白盖）

法 qRT-PCR 引物混合液

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型

15-87810pb

50 μL（棕色管）

qRT-PCR 探针

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型探针

法 qRT-PCR 阳性对照

60908-87810pc

50 μL（黄盖）

(1×10E8 拷贝/μL)

使用手册

15-87810sc

1 份
人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 使用方法
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
7.如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分

阴性对照

样品管

N+2 个

管

（2-7 管）

探针法 qRT-PCR 缓冲液

各 10 μL

10 μL

各 10 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型 qRT-

各 1 μL

1 μL

各 1 μL

PCR 探针

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型探针

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

法 qRT-PCR 引物混合液

待测样品 RNA 模板

各 5 μL

-

-

超纯水

-

5 μL

-

各 5 μL（2

第 7 步所得标准曲线样品稀释液

-

-

号样到2号

（2-7 号）

管，3 号样到

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