1 目的：为保证Alliance 2695型高效液相色谱仪的正确使用，建立Alliance 2695型高效液相色谱仪标准操作规程。

2 范围：适用于Alliance 2695型高效液相色谱仪操作的全部行为。 

3 责任：中心化验室对本SOP的实施全面负责。 

4 内容： 

4．1 开机 

4．1．1接通仪器插座电源开关。 

4．1．2 先打开2695主机的电源开关，再打开2996检测器的电源开关。 

4．1．3待2695主机与2996检测器自检完毕后，打开电脑显示器、电脑主机电源开关，计算机开始自检进入Windows 2000桌面。 

4．1．4在电脑屏幕上用鼠标双击Millennium32（M32）图标。进入Waters高压液相操作系统主窗口。成都雅源科技专业提供国产实验设备，进口实验设备（岛津、安捷伦等）主要产品：气相色谱仪、液相色谱仪、色谱柱、气相色谱柱、液相色谱柱、样品瓶、标准品、净化工作台、旋光仪、熔点仪、色谱纯试剂、纯水机、酒色谱、柱温箱、水分测定仪、分析天平、紫外可见分光光度计、离心机、旋转蒸发仪、超声波清洗机、定氮仪、氮吹仪、折光仪、酸度计、电导率仪、农残速测仪、生物安全柜、恒温湿箱、真空干燥箱、药物稳定性试验箱、培养箱、干燥箱、马弗炉、原子吸收等。

4．1．5单击M32主窗口上“Login”键，当出现User name提示时，输入使用者代号，在Password提示里输入此代号对应密码 。再按回车键即可激活Millennium32操作窗口。 

4．2 硬件操作 

4．2．1溶剂脱气 

先打开氦气瓶气体阀门，将分压表调至0．5MPa；按“Menu/Status”键，进入“Status(1)”界面，用“↑”、“↓”、“←”、“→”键在界面上 “Sparge”项中，选择A、B、C或D中所选用的溶剂流路号进行脱气处理（如选用A、B两瓶溶剂，则选择A-100%，B-100%，按“Enter”键开始脱气），脱气15～20分钟后，可将脱气量由100%降为30%。 

4．2．2干灌注 

如长时间未用机器溶剂管理系统流路是干的或系统中有空气存在时，需先做抽气灌注处理。 

4．2．2．1轻轻振荡溶剂瓶中的过滤头以除去可能存留的气泡； 

4．2．2．2打开溶剂输送单元进入门，在灌注排液阀出口插上一支注射器，然后打开排液阀（逆时针旋转半圈），不要将注射器固定在排液阀上，而要用手将其紧贴排液阀的出口； 

4．2．2．3按界面右下角“Direct Function”键进入子菜单，选择“Dry prime”项，按“Enter”键，在“duration”项中输入一数值（从5起），按屏幕上所需做灌注的流路号A、B、C或D键； 

4．2．2．4按“Continue”键，用一只手握住注射器，同时另一只手抽注射器的杆，使针筒中产生一段使流路中空气逸出所必需的真空； 

4．2．2．5重复此操作直至排液口有溶剂流出。（这可能需要几分钟时间，特别是当在线脱气机也同时在灌注时，时间会更长。） 

4．2．2．6此流路灌注完毕后，重复上述操作将4个溶剂通道都充满溶剂，然后关闭排液阀。按“Cancel”键退出“Dry prime”程序。 

4．2．3 湿灌注 成都雅源科技专业提供国产实验设备，进口实验设备（岛津、安捷伦等）主要产品：气相色谱仪、液相色谱仪、色谱柱、气相色谱柱、液相色谱柱、样品瓶、标准品、净化工作台、旋光仪、熔点仪、色谱纯试剂、纯水机、酒色谱、柱温箱、水分测定仪、分析天平、紫外可见分光光度计、离心机、旋转蒸发仪、超声波清洗机、定氮仪、氮吹仪、折光仪、酸度计、电导率仪、农残速测仪、生物安全柜、恒温湿箱、真空干燥箱、药物稳定性试验箱、培养箱、干燥箱、马弗炉、原子吸收等。在Status(1)界面上Composition项中A、B、C或D中选择所需湿洗处理的溶剂流路号，输入100%。（若选用两种以上溶剂，则按实际流动相溶剂配比分别输入各自百分比。如A-60%,B-40%）按界面右下角“Direct Function”键，在Direct Functions子菜单中选择“Wet prime”项，按“Enter”键,用箭头和数字键编辑流速及时间参数，按“OK”键，机器开始湿灌注操作。重复上述操作，直至所有需用溶剂流路均湿灌注完毕。按“Cancel”键退出“Wet prime”程序。 

4．2．4冲洗进样器 

按界面右下角“Direct Function”键，在Direct Functions子菜单中选择“Purge Injector”项，按“Enter”键, 用箭头和数字键编辑相关参数，按“OK”键，机器开始冲洗进样器。完毕后按“Cancel”键退出“Purge Injector”程序。 （生物秀仪器频道 www.bbioo.com）

4．2．5清洗进样针 

按“Menu/status”键切换到开机主界面，按“Diag”键，在诊断界面中按“Prime NdlWsh”键，按“Start”键，开始清洗进样针。完毕后按“Cancel”键退出“Prime NdlWsh”程序。 

4．2．6流路排气 

在诊断界面中按“Prime SealWsh”键，按“Start”键，清洗液开始灌注流路排出气泡。肉眼观察流路中没有气泡后，按“Halt”键停止灌注，按“Close”键退出“Prime SealWsh”程序。 

按“Exit”键退出诊断界面，“Menu/Status”回到“Status(1)”界面。 

4．3 软件操作
4．3．1 建立方法
4．3．1．1 进入Project窗口
在M32主窗口选项中选择所需的project，然后将Browse project打开，再按ok即可进入project窗口。
4．3．1．2 建立仪器方法
选择file，点New method，再点Instrument Method仪器自检后即可出现Instrument
Method Editor窗口，选择2695以及2996的有关项目，填好后选file，点save as输入仪器方法，按save，然后按Exit退出。
4．3．1．3 建立数据处理方法
选file,点processing Method即可出现processing Method Editor窗口，然后根据自己的要求在有关项目上填写，填好后选file，选Save as，输入处理方法名称后选Save，最后选Exit退出。
4．3．1．4 建立报告方法
选file，选Reporting Method即可出现Report publisher窗口，然后根据需要选择Chromatograms、Sample information以及result table，最后选save as，输入报告方法名称后选Exit退出。
4．3．1．5 建立仪器方法组
选择file，点New Method，再点Method Set即可出现Method Set Edit的窗口，在Instrument Method空白处选刚建立的仪器方法；在Default processing Method处选择刚建立的数据处理方法；在Default Report Method处选刚建立的报告方法，然后再选file，选Save as，输入仪器方法组名称，按Save，最后选Exit退出成都雅源科技专业提供国产实验设备，进口实验设备（岛津、安捷伦等）主要产品：气相色谱仪、液相色谱仪、色谱柱、气相色谱柱、液相色谱柱、样品瓶、标准品、净化工作台、旋光仪、熔点仪、色谱纯试剂、纯水机、酒色谱、柱温箱、水分测定仪、分析天平、紫外可见分光光度计、离心机、旋转蒸发仪、超声波清洗机、定氮仪、氮吹仪、折光仪、酸度计、电导率仪、农残速测仪、生物安全柜、恒温湿箱、真空干燥箱、药物稳定性试验箱、培养箱、干燥箱、马弗炉、原子吸收等。
4．3．2 进样
在Millennium32主窗口上选Run Samples，仪器即行自检后进入Quick set窗口，点击流速图标，在所用流动相流路号A、B、C或D项中输入所占百分比，并输入流速和其他参数，点击“OK”键，开始平衡系统（此步前应先用过滤水充分冲洗分析柱）。在Instrument Method处选自己需要的仪器方法，然后选Samples，填写Sample Name、 Function、 Method set、 Vial、injection以及Run time，最后按Monitor按钮监测基线，等基线平稳后即可进样。
4．3．3 数据处理与分析
进样结束后回到project窗口进行数据处理与分析，点channel，选择所需要的sample Name、选择review进入review窗口后即可处理与分析数据。
4．3．4 打印结果
先回到project窗口，然后打开打印机，准备好后点result处，选择所要打印的Sample Name，再点print按钮，出现打印窗口，选择ok即可。
4．4 关机
先将分析柱用过滤水冲洗充分，然后用过滤水冲洗进样器和进样针各3次，在将系统用甲醇或乙*等适当溶剂保护。最后将流速分阶段调至0，再将M32软件分窗口全部关掉，按主窗口上“Logout”推出M32操作系统。回到Windows 2000窗口，退出Windows 2000后，关掉主机电源开关，再关掉显示器，然后按顺序关掉2996，2695电源开关。
4．5 维护与保养
4．5．1分析柱每次用前先用过滤水冲洗3～4个柱体积，再用流动相平衡；用后也要用过滤水冲洗2～3个柱体积，再用无水甲醇或无水乙*保护。
4．5．2 打开控制泵后，要注意A、B、C、D四阀门是否停留在自己所需要的位置，各管吸头是否浸没在流动相液面下。
4．5．3启动泵之前，千万要注意先抽滤，使流动相充满所需要的各管，然后再调节流速。
4．5．4随时注意压力变化情况，如果压力变化较大，则说明有气泡进入了分析柱要及时排掉，否则影响分析结果。
4．5．5 检测器暂不用时要将紫外灯关掉，以延长其使用寿命。
4．5．6 关机前要用过滤水冲洗进样器和进样针各3次。以免残余物质腐蚀机器，影响下一次使用。

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