TGIRT-III Reverse Transcriptase说明书-分析方法-资讯-生物在线

TGIRT-III Reverse Transcriptase说明书

作者：上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (访问量:1437)

TGIRT-III Reverse Transcriptase

产品编号	产品名称	规格	价格(元)	说明书
XY9310	TGIRT-III Reverse Transcriptase	1nmol	2,500

TGIRT-III RTnase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性，能快速合成cDNA，该酶具有强的链转换活性（Switch）。因此该酶可用于tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头（TGIRT template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。TGIRT-III RTnase具有极强的延伸性能，因此更易获得全长的cDNA。除此外，该酶具有的强switch活性，使得可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库（SAMRT-Seq）。该酶的反应温度为37-60°C，最佳反应温度为50°C。

主要特征

比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性，持续性和保真度，允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端cDNA合成。
新的端对端模板转换活性，其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR接头，并且不再需要单独的RNA 3'-接头连接步骤
不需要RNA连接酶，对模板量要求低，使得RNA-seq文库构建步骤简化从而更高效。

组分

组分名称	1nmol
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl)	100 μl
5×TGIRT Buffer	1 ml
100mM DTT	0.5 ml

应用

链特异性转录组分析
全细胞或无细胞转录组测序
非编码RNA转录组测序
RIP-seq, HITS-CLIP, irCLIP and CRAC
通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰
RNA结构映射
长cDNA的合成
全基因组或靶向RNA结构分析

失活

反应结束后，向反应体系中加入1μl的5N NaOH，并置于95°C下加热3min，失活该酶。失活后加入5N HCl中和高碱性条件。

储存

长期储存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3个月）保存。

使用方法

1.典型的TGIRI-Seq反应：
5×TGIRT Buffer 4 μl
100mM DTT 2 μl
RNA 1~50ng
1μM of Annealed DNA/RNA duplex 2 μl
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl) 1 μl
RNase Free H2O up to 17.5 μl

室温孵育30min后，加入2.5 μl的10mM dNTP后，于37-60°C（推荐温度为50°C）条件下反应5-60min（通常15min）。

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